Beschreibung: Die Pfu-DNA-Polymerase ist eine thermostabile Polymerase von ca. 92 kDa Größe, ursprünglich isoliert aus dem hyperthermophilen Archaebakterium Pyrococcus furiosus. Das Enzym repliziert DNA bei einem Optimum von 75°C, indem es die Polymerisation von Nukleotiden zu Duplex-DNA in 5’ -> 3’-Richtung in Anwesenheit von Magnesium, und bevorzugt von MgSO4, katalysiert.

Anders als die Taq-DNA-Polymerase verfügt die Pfu-DNA-Polymerase zudem über eine 3’ -> 5’-Exonuklease-aktivität, die sogenannte „Proofreading-Aktivität“, welche die Korrektur falsch eingebauter Nukleotide und somit die Herstellung von nahezu fehlerfreien PCR-Produkten ermöglicht. Die Genauigkeit der DNA-Synthese ist gegenüber der Taq-DNA-Polymerase um das 12-fache erhöht, die Fehlerrate liegt bei 0,2 x 10 -5.

Die mit der Pfu-DNA-Polymerase erzeugten PCR-Produkte haben glatte Enden („blunt ends“) und können direkt in Ligationsreaktionen eingesetzt werden. Die Extensionsrate der Pfu-DNA-Polymerase liegt bei 0,5 kb/min, deshalb werden 1 - 2 min Extensionzeit/kb Fragmentlänge empfohlen.

Anwendungsgebiete: PCR- und Primer-Extensions-Reaktionen, die eine sehr hohe Genauigkeit benötigen.

Qualitätskontrolle: Einsatz in Test-PCRs; Überprüfung auf DNA-Hintergrund